比格犬都用什么实验?
本人曾经参与过小鼠基因打靶,转基因,分子克隆三个项目的实验。首先说一下基因打靶,这个需要小鼠胚胎干细胞,把要修改的基因连到一个载体上,通过显微注射的方式导入到胚胎干细胞的细胞核里面去,然后进行克隆培养,待小鼠出生以后检测target gene是否成功插入目标位置并表达。
接下来是转基因,这个方法相对简单。不需要导入DNA,而是通过显微注射的方法将RNA注入到胚胎干细胞里让其表达,之后做克隆培养和检测。 以上两个方法都需要用到小白鼠早期原肠期( embryonic day 5)的胚胎,这个时候的小白鼠胚胎容易死亡或者发育不完全,所以操作起来难度很大,成功率很低。
第三个方法是利用已经建系的成体小鼠细胞系,比如要研究脂肪代谢,就可以从小鼠的白色脂肪组织里面提取脂肪细胞,把要研究的基因导入到这些细胞里面,建立基因敲除或增加的小鼠细胞系,再通过细胞培养、生理生化实验来验证结果。 这个方法比前面两种都要简单一些,但是相对于在体实验来说还是复杂了很多,因为实验过程中需要对细胞进行冻存、激活等处理。但是这种方法不需要小鼠胚胎,所以对实验动物来说伤害较小。
目前我们实验室主要做的是基因编辑小鼠,也就是CRISPR/Cas9技术,相比前面三种方法这个技术的成功率更高,且不需要导入外来DNA,操作相对来说更简单一些。